Περιεχόμενο
Η φυματίωση είναι μια μολυσματική ασθένεια που προκαλείται από το βακτήριο Mycobacterium tuberculosis και είναι μια αναπνευστική νόσος που χαρακτηρίζεται από σχηματισμούς κονδύλων, νέκρωση, αποστήματα, ίνωση και ασβεστοποίηση στους πνεύμονες. Μπορεί επίσης να μολύνει τους νεφρούς, τους λεμφαδένες, τα οστά, τις αρθρώσεις και το δέρμα.
Η κύρια εργαστηριακή διάγνωση αυτού του βακίλλου περιλαμβάνει τη χρώση του για την απεικόνιση των βακτηρίων κάτω από το μικροσκόπιο. Το δείγμα επιλογής είναι πτύελα ή βρογχοκυψελιδική πλύση για τον εντοπισμό αναπνευστικής λοίμωξης ή δείγμα πραγματικού ιστού.
Φισιολογία
Το Mycobacterium tuberculosis είναι ένας οργανισμός σε σχήμα ράβδου (βακίλοι), μη κινητός, μη υποχρεωτικός σπόρος. Αυτό το βακτήριο έχει μήκος 0,4x3 μικρόμετρα και υφίσταται δυαδική σχάση (διαίρεση του αναπαραγωγικού κυττάρου) κάθε 15 έως 24 ώρες, η οποία θεωρείται αργή σε σύγκριση με άλλα βακτήρια. Εξαιτίας αυτού, το μυκοβακτηρίδιο μπορεί να χρειαστεί έως και εννέα εβδομάδες για να εμφανιστεί στο μέσο καλλιέργειας.
Αυτός ο οργανισμός είναι ευαίσθητος στο υπεριώδες φως και τη θερμότητα (όπως η παστερίωση), αλλά αντιστέκεται στα χημικά απολυμαντικά.
Gram λεκέ
Το Mycobacterium tuberculosis δεν μπορεί πραγματικά να ταξινομηθεί ως gram-θετικό ή gram-αρνητικό. Αυτή η ταξινόμηση γίνεται με βάση την ποσότητα πεπτιδογλυκάνης στο κυτταρικό τοίχωμα ενός βακτηρίου. Ένα θετικό σε gram είδος έχει ένα παχύ στρώμα αυτού του μορίου (περίπου 90%), ενώ ένα gram-αρνητικό είδος έχει ένα λεπτό στρώμα (από 5% έως 20%). Οι λεκέδες γραμμαρίου διεισδύουν στο κυτταρικό τοίχωμα και συνδέονται με τα χημικά συστατικά σε αυτό. Κάτω από το μικροσκόπιο, τα βαμμένα βακτήρια θα γίνουν μοβ ή ροζ.
Με το mycobacterium tuberculosis, το κυτταρικό τοίχωμα αποτελείται από πεπτιδογλυκάνη, αλλά και σύνθετα λιπίδια που αναστέλλουν τη διείσδυση της βαφής σε γραμμάρια. Το κυτταρικό τοίχωμα αντιστέκεται επίσης στον αποχρωματισμό από οξύ ή αλκοόλη, γι 'αυτό το μυκοβακτηρίδιο ονομάζεται «ανθεκτικό στα οξέα». Τα λιπίδια των κυτταρικών τοιχωμάτων είναι μυκολικό οξύ, παράγοντας χορδών και D-κερί. Εάν τα βακτήρια επρόκειτο να χρωματιστούν, τα κύτταρα θα φαινόταν θετικά κατά gram ή ελαφρώς ωχρά με πολύ λίγο χρώμα.
Για να δείτε τα βακτήρια, πρέπει να χρησιμοποιήσετε ειδικούς λεκέδες, όπως το Aumarine ή το Zhiel-Neelson.
Βαφή Aumarine-rhodamine
Η διαδικασία που χρησιμοποιεί auramine-rhodamine χρησιμοποιεί μια κίτρινη βαφή φθορισμού για την απεικόνιση του mycobacterium tuberculosis κάτω από ένα μικροσκόπιο φθορισμού. Το υπερμαγγανικό κάλιο ή το πορτοκαλί ακριδίνης μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως βαφή αντίθεσης. Κάτω από το φακό, τα βακτηριακά κύτταρα θα εμφανίζονται πράσινα.
Η βαφή auramine-rhodamine είναι πιο ευαίσθητη από την Zhiel-Neelson και πιο οικονομικά βιώσιμη.
Ziehl-Neelson χρωματισμός
Η κηλίδα Ziehl-Neelson δημιουργήθηκε από τους επιστήμονες Franz Ziehl και Friedrich Neelsen και χρησιμοποιεί θερμαινόμενο carbol-fuchsin, υψηλή συγκέντρωση οξέος-αλκοόλης και βαφή αντίθεσης, όπως πράσινο μαλαχίτη ή μπλε μεθυλενίου. Κάτω από ένα μικροσκόπιο φθορισμού, τα βακτηριακά κύτταρα θα εμφανίζονται έντονα ροζ.
Η βαφή Ziehl-Neelson είναι το πρότυπο αριστείας για την προκαταρκτική αναγνώριση του mycobacterium tuberculosis και του mycobacterium leprae.
Αγάρ
Δευτερεύουσα της αναγνώρισης της μικροσκοπίας, το mycobacterium tuberculosis πρέπει να καλλιεργείται σε ειδική καλλιέργεια άγαρ. Η ζελατίνη Lowenstein-Jensen έχει σύνθετες οργανικές ουσίες (όπως αυγά και πατάτες), άλατα, γλυκερόλη και πράσινο μαλαχίτη (που αναστέλλει άλλα βακτήρια). Τα αντιβιοτικά μπορούν να προστεθούν για περαιτέρω αναστολή μολυσματικών μικροοργανισμών. Το δείγμα τοποθετείται σε αυτό το άγαρ και τα βακτήρια αναπτύσσονται σε τρεις έως εννέα εβδομάδες.
Ένα διάλυμα καλλιέργειας θρεπτικών συστατικών, όπως η αλβουμίνη και η βιοτίνη, μπορούν να χρησιμοποιηθούν για να υποστηρίξουν την ανάπτυξη ακόμη και της μικρότερης ποσότητας βακτηρίων στόχου. Αυτό είναι γνωστό ως Middlebrook 7H9 (ή 7H12).
Και στα δύο μέσα, οι αποικίες θα εμφανίζονται ως μικρές, στιλβωμένες, ανοικτές καφέ αποικίες.
Με την προηγμένη τεχνολογία, το mycobacterium tuberculosis μπορεί τώρα να αναπτυχθεί χρησιμοποιώντας έναν αυτοματοποιημένο αναγνώστη. Ένα υγρό διάλυμα μέσου Middlebrook 7H9 και μια ένωση φθορίζοντος δείκτη χρησιμοποιούνται για την παρακολούθηση της ανάπτυξης και την αναφορά θετικών ή αρνητικών λοιμώξεων.